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顯微成像·洞察微觀之美
Microscopic imaging, insight into the beauty of micro
多色熒光原位雜交技術(shù)(M-FISH)的基本原理及應(yīng)用
發(fā)布時(shí)間：2024-12-05
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熒光原位雜交技術(shù)(fluorescence in situ hybridization，F(xiàn)ISH)是根據(jù)核酸堿基互補(bǔ)配對(duì)原理，用半抗原標(biāo)記DNA或者RNA探針與經(jīng)過變性的單鏈核酸序列互補(bǔ)配對(duì)，通過帶有熒光基團(tuán)的抗體去識(shí)別半抗原進(jìn)行檢測，或者用熒光基團(tuán)對(duì)探針進(jìn)行直接標(biāo)記并與目標(biāo)序列結(jié)合，利用熒光顯微鏡直接觀察目標(biāo)序列在細(xì)胞核、染色體或切片組織中的分布情況。M-FISH則是在熒光原位雜交基礎(chǔ)上發(fā)展起來的新技術(shù)，它不僅具有FISH的優(yōu)點(diǎn)，而且克服了FISH的許多局限，其特點(diǎn)是可將多次繁瑣的FISH實(shí)驗(yàn)和多種不同的基因定位在一次FISH實(shí)驗(yàn)中完成。M-FISH能同時(shí)檢測多個(gè)基因，分辨復(fù)雜的染色體易位和微小缺失，區(qū)分間期細(xì)胞多倍體和超二倍體等。M-FISH用激發(fā)光譜和吸收光譜不同的熒光索按一定調(diào)色方法標(biāo)記不同的探針，從而對(duì)不同靶DNA同時(shí)進(jìn)行定位和分析，并能對(duì)不同探針在染色體上的位置進(jìn)行排序。
探針熒光素顏色調(diào)配的方法有非調(diào)色法，混合調(diào)色法和比例調(diào)色法。這3種調(diào)色法中，比例調(diào)色法只需要幾種熒光素就可標(biāo)記多種探針，因而更有發(fā)展?jié)摿?。染色體描繪、比較基因組雜交、光譜染色體自動(dòng)核型分析、交叉核素色帶分析及多彩色原位啟動(dòng)標(biāo)記等技術(shù)都是在M-FISH的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的。
與其他原位雜交技術(shù)相比，多色熒光原位雜交具有很多優(yōu)點(diǎn)，主要體現(xiàn)在：
①宜于多靶雜交，可對(duì)同一個(gè)細(xì)胞學(xué)制片進(jìn)行多個(gè)探針雜交；
②通過在同一個(gè)核中顯示不同的顏色可一次性顯示全部的染色體數(shù)量或結(jié)構(gòu)的變化；
③能檢測到傳統(tǒng)顯帶方法不易發(fā)現(xiàn)的亞纖維染色體畸變不僅能夠鑒定隱藏的易位和復(fù)雜的重拍，而且可以分析與腫瘤發(fā)生相關(guān)的重要標(biāo)記染色體及其基因。
目前該項(xiàng)技術(shù)目前已廣泛應(yīng)用于動(dòng)植物基因組結(jié)構(gòu)研究，染色體精細(xì)結(jié)構(gòu)變異分析，病毒感染分析，微生態(tài)分析，腫瘤遺傳學(xué)和基因組進(jìn)化研究等許多領(lǐng)域。
明美MFISH熒光原位雜交分析系統(tǒng) 就是一款專為熒光顯微圖像的捕捉和處理而開發(fā)的實(shí)用圖像軟件。它搭配不同波段光譜濾光片的熒光顯微鏡以及高靈敏度的相機(jī)可對(duì)多種探針信號(hào)進(jìn)行檢測成像，還有區(qū)域自動(dòng)曝光，自動(dòng)著色，信號(hào)點(diǎn)增強(qiáng)，一鍵合成多色熒光通道圖像，自定義各種顏色的探針，多焦面信號(hào)景深疊加，多層圖像位置偏移較正等功能。
深圳禾正醫(yī)院的老師采用了明美的MFISH熒光原位雜交分析系統(tǒng)，檢測中用her2/cep17的比值來測定是否有此原癌基因擴(kuò)增，當(dāng)HER2／CEP17比值≥2.0時(shí)，為HER2陽性；此外老師還定制了雙通道熒光模塊，可以同時(shí)在目鏡下觀察到紅綠兩種顏色的信號(hào)點(diǎn)，大大提高科室的工作效率。
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