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【案例背景】

深圳某科研檢測公司需要開展對腫瘤的輔助診斷研究，需要用到熒光原位雜交技術(shù)（Fluorescence In Situ Hybridization, FISH）. Mshot明美推薦了研究級熒光顯微鏡MF43-N搭配四通道光源MG-120，可以即開即用提供高質(zhì)量的熒光和明場成像，可以自主選擇和升級熒光激發(fā)塊，可對FISH樣品進(jìn)行單色熒光或雙色熒光觀察。搭配明美自主研發(fā)的FISH熒光原位雜交分析軟件，快速成像，自動著色，一鍵合成多色熒光圖像，直觀地判斷最終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，功能強(qiáng)大，使用方便，效果得到客戶認(rèn)可。

【實(shí)驗(yàn)/設(shè)備條件】

防震的工作臺、暗室環(huán)境

【儀器/耗材清單】

明美研究級熒光顯微鏡MF43-N，載玻片，蓋玻片，香柏油

【樣品】

待檢的FISH樣品

【實(shí)驗(yàn)/操作方法】

（一）概述

實(shí)驗(yàn)主要使用明美研究級顯微鏡MF43-N和FISH熒光原位雜交分析系統(tǒng)進(jìn)行，熒光顯微鏡用于熒光激發(fā)和放大FISH樣品的信號點(diǎn)，F(xiàn)ISH熒光原位雜交分析系統(tǒng)可對熒光顯微圖像進(jìn)行捕捉和處理。

（二）制樣

FISH樣品一般為手術(shù)組織切片，穿刺組織切片，腫瘤細(xì)胞塊等，不同樣品類型，制樣和染色方法會有不同。

①組織切片以HER2常規(guī)石蠟包埋組織切片為例，新鮮樣本取材后經(jīng)過固定、水洗、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片和烘烤制備成常規(guī)切片，過程中特別注意固定和切片，樣品厚度保持在3-5um最佳。染色可分為預(yù)處理、雜交、洗滌、復(fù)染四步，尤其注意預(yù)處理的脫蠟、煮片、酶消化，以及雜交中的變性（加熒光探針）。

②細(xì)胞學(xué)樣品以產(chǎn)前染色體數(shù)目檢查為例，制樣經(jīng)過低滲、預(yù)固定、滴片三步，需要充分的低滲和合適的細(xì)胞密度，可能需要用到倒置顯微鏡相襯觀察來控制細(xì)胞密度。染色也可分為預(yù)處理、雜交、洗滌、復(fù)染四步，預(yù)處理的消化和充分洗滌比較影響成像效果。

（三）觀察

①將制樣好的玻片放上載物臺，用樣品夾固定，在蓋玻片上滴一滴香柏油。

②把明美熒光顯微鏡的激發(fā)光切換到紫外熒光，物鏡切換到100X的油鏡，調(diào)節(jié)調(diào)焦機(jī)構(gòu)使物鏡與香柏油接觸，然后左右微微旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)盤，使物鏡與香柏油充分接觸，排出空氣，然后進(jìn)行對焦

③選擇合適的樣品區(qū)域，分別用紫外、藍(lán)色和綠色激發(fā)光觀察FISH樣品，然后用明美FISH熒光原位雜交分析系統(tǒng)分別進(jìn)行采圖，最后在軟件上對圖片進(jìn)行合成處理，得到最終所需的FISH樣品圖片。

MF43-N+MSX11拍攝的FISH圖片

FISH樣品在紫外激發(fā)光的照射在，顯現(xiàn)出藍(lán)色的細(xì)胞輪廓的信號，在藍(lán)色激發(fā)光的照射下在細(xì)胞內(nèi)顯現(xiàn)出綠色的探針信號，在綠色激發(fā)光的照射下在細(xì)胞內(nèi)顯現(xiàn)出紅色的探針信號。

【實(shí)驗(yàn)結(jié)果/結(jié)論】

選擇細(xì)胞核邊界完整、無重疊，標(biāo)記的紅色信號和標(biāo)記的綠色信號清晰的細(xì)胞，隨機(jī)計(jì)數(shù)至少20個(gè)細(xì)胞核中雙色信號。判斷信號點(diǎn)有無分離或者有無擴(kuò)增等，并在專業(yè)的病理醫(yī)師或技術(shù)人員的指導(dǎo)下對結(jié)果進(jìn)行判讀，保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。明美研究級正置熒光顯微鏡MF43-N采用優(yōu)良的無限遠(yuǎn)光學(xué)系統(tǒng)，搭配四通道光源MG-120，熒光激發(fā)信號強(qiáng)，并且可以即開即用，可以選配單通或雙通熒光激發(fā)塊，可供選擇的熒光波段繁多且亮度高，可滿足FISH領(lǐng)域的研究需要，也應(yīng)用于生物制藥，醫(yī)學(xué)檢測、疾病預(yù)防等領(lǐng)域內(nèi)的熒光檢測。

【場景圖/實(shí)拍效果圖】

熒光顯微鏡MF43-N，現(xiàn)場拍攝的FISH樣品效果圖

【關(guān)于明美】

廣州明美是專注顯微成像研發(fā)、生產(chǎn)和銷售的專精特新企業(yè)，創(chuàng)立于 2003 年，公司組建有光、機(jī)、電和軟件領(lǐng)域的專業(yè)團(tuán)隊(duì)，致力于顯微領(lǐng)域的數(shù)字化、自動化、智能化，是廣東省顯微成像工程技術(shù)研究中心，公司以品質(zhì)謀發(fā)展，已通過 ISO9001、ISO13485 和 ISO14001 等管理體系認(rèn)證，可為客戶提供全面的顯微成像解決方案；服務(wù)范圍覆蓋全國 20 多個(gè)城市和國外 30 多個(gè)國家地區(qū)，為全球 10 萬+用戶提供完善的全流程服務(wù)。

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